10 مل معبأة خلية النتروك بروبيديوم أيوديدي بي ستان

بي آي، أو اليود الإيود الإيثيلين، هو تناظر بروميد الإيثيديوم، والذي يمكن أن يكون ملتصقاً بقوة مع الحمض النووي. فهو يطلق فلورة حمراء بعد إدخاله في الحمض النووي ثنائي الحبيبي لتحقيق بقع من الحمض النووي أو أنوية الخلية. لا يستطيع برنامج PI اختراق غشاء الخلية السليم، ولكنه يمكنه اختراق غشاء الخلية التالفة للخلايا اللاوبتوية المتأخرة والخلايا الميتة. للاستفادة من هذه الميزة، يستخدم PI عادة مع مسبارات الفلورسنت مثل Calcein-AM أو FDA لطخة الخلايا الحية والميتة وملاحظتها. أو استخدم قياس التدفق الخلوي لاكتشاف تكاثر الخلية ودورة الخلية كمياً. أقصى طول موجة إثارة لمعقد الحمض النووي ثنائي الحبيبي هو 535nm، وأقصى طول موجي للانبعاثات هو 615nm.

محلول بقع PI لهذا المنتج جاهز للاستخدام، بتركيز PI 100 ميكروغرام/مل، والذي يمكن استخدامه مباشرة لتسخين الخلايا أو الأنسجة النيكوية، ويمكن أن يكون تعليق الخلية ملطخًا بهذا الحل الملطخ لاكتشاف دورة الخلية بواسطة قياس التدفق الخلوي.

الاستخدام:

خطوات التشغيل الخاصة بالقياس الخلوي للتدفق لاكتشاف دورة الخلية:

1) يتم تحفر الخلايا الحية المتحصَّرة وغسلها باستخدام PBS، ويتم تجميعها عن طريق الطرد المركزي منخفض السرعة للحصول على حبيبات الخلايا.

2. أضف ببطء 1-3 مل من 90% من الإيثانول المبرّد مسبقًا في -20 درجة مئوية إلى كريات الخلايا، وأقم الخلايا في حمام ثلج بين عشية وضحاها.

3. قم بإجراء الطرد المركزي بقوة جاذبية تبلغ 1500 دورة في الدقيقة لمدة 5 دقائق لجمع الخلايا وإنعاش الخلايا في PBS، ثم قم بإجراء الطرد المركزي مرة أخرى لإزالة المادة الطافية.

4) أضف 250 ميكرولتر PBS لإنعاش الخلايا.

5) أضف 2 ميكرولتر من الرينس أ (WGR8021 الموصى به) بتركيز 1 ملغ/مل، وحوض استحمام بالماء عند درجة حرارة 37 درجة مئوية لمدة 40 دقيقة

6) أضف 50 ميكرولتر من محلول بقع PI وقم بالحضانة في الظلام لمدة 20 دقيقة (يمكن تعديل الوقت وفقًا لنتائج بقع المواد التجريبية).

7) اكتشاف قياس التدفق الخلوي.

خطوات عملية رصد مجهر التلوير للخلايا الحية والميتة:

1) بعد وضع الخلايا المملتصقة في الخلايا، أزل الوسط واغسل مرتين مع PBS.

2) خفف محلول بقع PI بمقدار 10-20 مرة باستخدام PBS لتحضير محلول بقع من PI بتركيز نهائي يتراوح بين 5-10 ميكروغرام/مل. أضف كمية مناسبة من محلول عمل بقع PI إلى البئر لتغطية الخلايا، وقم بالحضانة لمدة 5 إلى 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة في الظلام.

3) تخلص من عمل البقع وأضف PBS لتغطية الخلايا ولاحظ باستخدام مجهر فلوري. وتظهر أنوية الخلايا الميتة أو الخلايا الميتة المتأخرة الفلورية الحمراء.

1. أصباغ الفلورسنت تعاني من مشكلة الحكة. يوصى بإكمال الاختبار في اليوم نفسه بعد عملية الصباغة.

2. يرجى ارتداء معطف المختبر والقفازات التي تستعمل لمرة واحدة أثناء التشغيل.